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PCR实验室设计要求、污染预防和控制,看懂秒变PCR实验室大神!
点击次数:636 发布时间:2018-08-06

一、PCR实验室平面布局

PCR实验室布局图

PCR实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配置和扩增区、扩增产物分析区,为了避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区,各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。

二、实验室空调通风系统设计及压力控制

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实验室空调通风系统

PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,适合用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证实验区的压力要求。

二、1 实际贮存和准备区

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PCR实验室主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装盒主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送到这个区,不得经过其他区域。试剂原料必须贮存在本区内,并再本区内制备成所需的贮存试剂。该区对与气流压力的控制没有严格的要求。

二、2 标本制备区

该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入值扩增反应管和测定DNA的合成。压力梯度要求为:相对领巾区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染,另外由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。

二、3 扩增反应混合物配制和扩增区

该区域主要进行的操作为DNA扩增,此外,已制备的DNA模板(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可以在本区内进行。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的布必要走动,个别操作如加样等应在超净台内进行。

二、4 扩增产物分析区

该区域主要进行的操作为扩增片段的测定,本区是zui主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度要求为相对邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其他区域。

三、污染的预防与控制

PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染,在试剂工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。一旦发生污染,实验就必须停止,直到找到污染源为止,而且实验结果必须作废,需要重新进行实验,所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐,浪费人力物力。因此要避免污染,首先应该是预防,而不是排除。

三、1 工作区域的严格划分

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1、各个实验区域设置合理;

2、各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同颜色的地面等等),以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。

三、2 合理的系统设置

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1、合理的空调通风系统设置,尽量采用全送全排的空调系统;

2、严格的气流压力控制,保证不同的实验区内不同的压力要求。

三、3 规范的操作

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1、扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训,经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作;

2、在实验操作过程中,操作者必须戴手套,并经常更换。此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效防止污染的措施;

3、清洁工作及时、正确。实验工作结束后,必须立即对本区进行清洁。除了常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外灯的消毒外,对一些实验设备还应进行高压消毒处理。

三、4 严格的管理

PCR实验室

1、严格控制进出实验室的人员,与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门;

2、尽量减少在实验区内不必要的走动以及减少交叉污染的可能;

3、扩增产物分析区是zui主要的扩增产物污染来源,废液不能再实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应该经过消毒液浸泡后统一处理,如焚烧等;

4、扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验室人员的安全防护;

三、5 完善的实验室配套设备

PCR实验室

完备的实验室设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台,离心机。加样器等等。

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